เอกสารประชุมวิชาการระดับขาติมหาวิทยาลัยทักษิณ ครั้งที่ 28 2561

906 การประชุมวิชาการระดับชาติมหาวิทยาลัยทักษิณ ครั้งที่ 28 ประจ�าปี 2561 7. การทดสอบคüามđðŨนพิþต่อđàลล์ โดยüิธี MTT assay จากการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ ด้วยวิธี MTT assay โดยการวัดค่าการดูดกลืนแสงของสารละลายด้วยเครื่อง สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ ซึ่งใช้ยาอีโทโปไซด์เป็นตัวควบคุมเชิงบวกในการทดลอง โดยทาการทดลองซ้า 2 ครั้ง เพื่อคานวณหา ค่าเปอร์เซĘนต์ความเข้มข้นของสารที่ออกฤทธิ์ยับยั้งได้ 50 เปอร์เซĘนต์ IC 50 พบว่าสารจากฟ้าทะลายโจรมีค่า IC 50 มากกว่า 00 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร รายงานผลได้ว่าไม่มีความเป็นพิษเซลล์ผิวหนัง HaCaT และ Etoposide มีค่า IC 50 เท่ากับ 4.25 ± 0. 5 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร (ตารางที่ 5) ตารางทีę 5 ความเข้มข้นของสารที่ออกฤทธิ์ยับยั้งได้ 50 เปอร์เซĘนต์ IC 50 ของเซลล์ผิวหนัง HaCaT ตัüอย่างสาร IC 50 (µg/ml) แอนโดรกราโฟไลด์ >400 Etoposide 5.8±0.14 จากการศึกษาเพื่อทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ของสารแอนโดรกราโฟไลด์แยกจากใบฟ้าทะลายโจรที่สกัดด้วยเมทานอล ด้วยวิธี MTT assay ซึ่งเป็น colorimetric assay ใช้หลักการว่าสาร MTT ซึ่งเป็นสีเหลือง จะถูกเปลี่ยนเป็นสาร Formazan ซึ่งมีสีม่วง เซลล์ที่ไม่มีชีวิตหรือเซลล์ที่ตายแล้ว กĘจะไม่สามารถเปลี่ยนสีดังกล่าวได้ ดังนั้นวิธีนี้จึงนิยมใช้ในการ ตรวจวัดความอยู่รอดของเซลล์ ดังนั้นจึงใช้วิธี MTT assay ในการตรวจวัดความอยู่รอดของเซลล์ไลน์ผิวหนัง HaCaT ที่ ความเข้มข้นของสารสกัดจากใบฟ้าทะลายโจรตั้งแต่ 5- 00 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร โดยการหาค่า IC 50 ซึ่งค่านี้หมายถึง ปริมาณสารของที่ทดสอบที่ทาให้เซลล์ตายไป 50 เปอร์เซĘนต์ หากสารสกัดมีพิษต่อเซลล์ใดมาก กĘจะแสดงค่า IC 50 น้อย ซึ่ง ตาม Standard National Cancer Institute Criteria (Chen et al 1 88 Geran and Abbott (1 หากค่า IC 50 ของสารตัวอย่างสูงกว่า 0 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ถือว่าสารนั้นไม่เป็นพิษต่อเซลล์ หรือที่ทางกลับกันหากค่า IC 50 ของสาร ตัวอย่างต่ากว่า 0 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ถือว่าสารนั้นเป็นพิษต่อเซลล์ พบว่าสารสกัดจากฟ้าทะลายโจรด้วยเมทานอลไม่ แสดงค่า มีค่า IC 50 ที่ความเข้มข้นสูงสุด 00 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร มีเปอร์เซĘนต์ความอยู่รอดที่ความสูงถึง 8 . เปอร์เซĘนต์ จึงบอกได้ว่าสารสกัดไม่เป็นพิษต่อเซลล์ผิวหนัง HaCaT สรุปผลการวิจัย จากการทดลองศึกษาฤทธิ์ต้านจุลชีพของแอนโดรกราโฟไลด์แยกจากใบฟ้าทะลายโจรต่อเชื้อก่อโรคทาง ทันตกรรม S. mutans ATCC25175 โดยการทดสอบเบื้องต้นที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตรพบว่าสามารถยับยั้ง เชื้อ S. mutans ATCC25175 ได้ และนาไปทดสอบการยับยั้งการเจริญของเชื้อ S. mutans ATCC 25175 โดยวิธี Broth microdilution method เป็นวิธีที่หาความเข้มข้นต่าสุดในการยับยั้งเชื้อได้ (Minimal Inhibition Concentration, MIC) ได้เท่ากับ 800 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร เมื่อนาไปทดสอบหาค่าความเข้มข้นต่าสุดของสารสกัดที่สามารถฆ่าเชื้อจุลินทรีย์ที่ ทดสอบได้ (The minimum bactericidal concentration: MBC) ได้ค่ามากกว่า 1,000 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร และ ทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ไลน์ผิวหนัง (HaCaT) พบว่าสารสกัดฟ้าทะลายโจรไม่มีความเป็นพิษต่อเซลล์ผิวหนัง มีค่า IC 50 มากกว่า 400 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ดังนั้นจึงมีความน่าสนใจที่จะนาสารแอนโดรกราโฟไลด์จากฟ้าทะลายโจร มา พัฒนาเป็นผลิตภัณฑ์ในการดูแลช่องปาก เพื่อลดปัญหาฟันผุซึ่งมีผลจากเชื้อ S. mutans คาขอบคุณ ขอขอบคุณสาขาวิชาชีววิทยา และสาขาวิชาวิทยาศาสตร์และคณิตศาสตร์พื้นฐาน คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยทักษิณ ที่เอื้อเฟื้อสถานที่ในการทาวิจัยในครั้งนี้