Proceeding2562

1101 การประชุมวิชาการระดับชาติมหาวิทยาลัยทักษิณ ครั้งที่ 29 ประจ�ำปี 2562 วิจัยและนวัตกรรมเพื่อการพัฒนาที่ยั่งยืน การทดสอบ Antimicrobial susceptibility test หรือ Disc diffusion test ใช้ไม้พันสาลีที่ผ่านการฆ่าเชื้อจุ่มลงในสารละลายเชื้อแบคทีเรีย แล้วป้ายลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อ Mueller-Hinton agar และ Blood agar จากนั้นวางแผ่น disc ยาต้านจุลชีพชนิดต่างๆ ลงในจานเพาะเชื้อ [10] รวมทั้งหมด 14 ตัวยาต่อเชื้อแต่ละชนิด โดยยาที่ใช้ได้แก่ cefoxitin (30 mcg), clindamycin (2 mcg), chloramphenicol (30 mcg), enrofloxacin (5 mcg), erythromycin (15 mcg), gentamicin (10 mcg), novobiocin (5 mcg), oxacillin (1 mcg), penicillin (10 units), polymyxin B (300 mcg), sulfamethoxazole /trimethoprim (25 mcg), streptomycin (10 mcg), tetracycline (30 mcg) และ vancomycin (30 mcg) บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลานาน 24 ชั่วโมง แล้ววัดและบันทึก เส้นผ่าศูนย์กลางของ Inhibition zone ที่เกิดขึ้นรอบยาปฏิชีวนะ จากนั้นนาผลที่ได้มาเปรียบเทียบกับข้อมูลของ National Committee for Clinical Laboratory Standards [11] และบันทึกผลเป็น Sensitivite (S), Intermediate (I) และ Resistance (R) การทดสอบเชื้อ MRSA โดยเทคนิค PCR และ Agarose gel electrophoresis การสกัดเชื้อโดยนาเชื้อ Staphylococcus aureus 3 โคโลนีในน้า 1 มล. ไปปั่นที่ความเร็ว 10,000 g นาน 1 นาที นา ส่วนตะกอนไปเติมน้า 50 ไมโครลิตร แล้วต้มที่ 100 องศาเซลเซียส นาน 10 นาที ปั่นอีกครั้ง แล้วเก็บที่ -20 องศาเซลเซียส เพื่อ รอการทดสอบ การเพิ่มจานวนโดยเทคนิค PCR จานวนทั้งหมด 40 รอบ โดยขั้นตอน Denaturationที่ 95 องศาเซลเซียส นาน 30 วินาที ขั้นตอน Annealing ที่ 55 องศาเซลเซียส นาน 30 วินาที ขั้นตอน Extension ที่ 72 องศาเซลเซียส นาน 30 วินาที และใช้ ไพรเมอร์ดังแสดง Primer name Sequence (5  -3  ) mecA P4 (forward primer) TCCAGATTACAACTTCACCAGG mecA P7 (reverse primer) CCACTTCATATCTTGTAACG การทดสอบโดย Agarose gel electrophoresis ใช้ 1.5 % agarose และ กระแสไฟฟ้า 100 โวลท์ นาน 40 นาทีและ ใช้ DNA marker: 100 bp DNA ladder (Thermo Fisher Scientific) การทดสอบ D test หลังจากป้ายเชื้อลงบน Mueller-Hinton agar วางเเผ่น disc ยา erythromycin และ clindamycin ลงในเพลทโดย วางทั้งสองห่างกัน 15-26 มิลลิเมตร จากนั้นนาไปบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง และสังเกตลักษณะ Inhibition zone ที่เกิดขึ้น และอ่านผลเป็น Positive หรือ Negative D test [12,13] ผลการวิจัยและอภิปรายผลการวิจัย จากการศึกษาผลความไวและดื้อยาของเชื้อแบคทีเรียที่ก่อโรคในสัตว์ อันได้แก่ เชื้อแบคทีเรียกลุ่ม Staphylococcus spp. จานวน 17 ตัวอย่าง กลุ่ม Streptococcus spp. 6 ตัวอย่าง และเชื้อแบคทีเรียแกรมลบ 6 ตัวอย่าง โดยศึกษาด้วยวิธี Disc diffusion test พบว่าเชื้อแบคทีเรียกลุ่ม Staphylococcus spp. มีความไวต่อยาปฎิชีวนะทุกกลุ่ม (ตารางที่ 1) โดยทุกตัวอย่างมี ความไวต่อยา cefoxitin, novobiocin, oxacillin และ vancomycin มากที่สุด (100% ; n=17) และมีความไวต่อยาปฎิชีวนะ ทุกกลุ่มยกเว้น penicillin อยู่ในระดับสูง ( ≥ 70.59% ; ≥ n ≥12) ในขณะที่มีความไวต่อ penicillin น้อยที่สุด (52.94% ; n=9)