วารสารเทคโนโลยีและนวัตกรรมเกษตร ปีที่ 2 ฉบับที่ 1

การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อหญ้าชะเงาเต่า ( Thalassia hemprichii ) (Ehrenberg) Ascheron 3.2 ศึกษาการฟอกฆ่าเชื้อชิ้นส่วนเนื้อเยื่อของหญ้าทะเลที่เหมาะสมในการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อหญ้าชะเงาเต่า (Thalassia hemprichii) การเตรียมสารฟอกฆ่าเชื้อที่ระดับความเข้มข้น และระยะเวลาต่างๆ ด้วยสารฟอกฆ่าเชื้อ Sodium Hypochlorite as available Chlorine 6 % w/w โดยใช้น้ำทะเลความเค็ม 28 psu ที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วแทนน้ำกลั่น สำหรับชิ้นส่วนใบ โคนใบ และลำต้นใต้ดิน วางแผนการทดลองแบบสุ่มตลอด (Completely Randomized Design) มีทั้งหมด 7 สิ่งทดลองๆ ละ 10 ซ้ำ โดยในสิ่งทดลองที่ 1-4 เป็นการฟอกฆ่าเชื้อด้วย ความเข้มข้น 20 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 5,10,15 และ 20 นาที เพียงครั้งเดียว สิ่งทดลองที่ 5 เป็นการฟอกฆ่าเชื้อด้วย Sodium Hypochlorite as available Chlorine 6% w/w ครั้งที่ 1 ความเข้มข้น 8 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 10 นาที และครั้งที่ 2 ความเข้มข้น 4 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 15 นาที สิ่งทดลองที่ 6 ฟอกฆ่าเชื้อด้วยความเข้มข้น 10 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 10 นาที และครั้งที่ 2 ความเข้มข้น 5 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 15 นาที และสิ่งทดลองที่ 7 ฟอกฆ่าเชื้อด้วยความเข้มข้น 12 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 10 นาที และ ครั้งที่ 2 ความเข้มข้น 6 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 15 นาที จากนั้นย้ายชิ้นเนื้อเยื่อในตู้ปลอดเชื้อ ที่ผ่านการฟอกฆ่าเชื้อด้วย วิธีต่างๆ ตัดแต่งชิ้นส่วนใบ โคนใบ และลำต้นใต้ดิน ย้ายลงอาหารกึ่งแข็งสูตร MS (Murashige and Skoog, 1962) เป็นเวลา 4 สัปดาห์ เพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 25 ± 2 องศาเซลเซียส ให้แสงสว่างด้วยหลอดไฟเรืองแสงสีขาวความเข้มแสง ประมาณ 40 µmol Photons m-2s-1 เป็นเวลา 12 ชั่วโมงต่อวัน บันทึกผลการทดลองอัตราการรอดชีวิตและนับจำนวน ชิ้นส่วนที่มีการปนเปื้อนเชื้อจุลินทรีย์ และการเจริญเป็นต้นใหม่ พร้อมบันทึกภาพ 3.3 ศึกษาสารควบคุมการเจริญเติบโตที่มีความเหมาะสมต่อการพัฒนาเนื้อเยื่อหญ้าชะเงาเต่า (Thalassia hemprichii) นำชิ้นส่วนหญ้าชะเงาเต่า (Thalassia hemprichii) ในสภาพปลอดเชื้อมาตัดแต่งชิ้นส่วนให้มีขนาด 1.5 เซนติเมตร เลี้ยงบนอาหารกึ่งแข็งสูตร MS (Murashige and Skoog, 1962) ที่เติม BA ระดับความเข้มข้น 0 0.5 1.0 2.0 และ 3.0 มิลลิกรัมต่อลิตร และ NAA ระดับความเข้มข้น 0 0.5 1.0 2.0 และ 3.0 มิลลิกรัมต่อลิตร เลี้ยงในสภาพอุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส และให้แสงวันละ 16 ชั่วโมงต่อวัน ภายในระยะเวลา 2 เดือน เปลี่ยนถ่ายอาหารให้ต้นอ่อนทุกเดือนบันทึก อัตราการรอดและความสูงลักษณะการพัฒนาของชิ้นเนื้อเยื่อ สรุปผล (Results) 1. ศึกษาการฟอกฆ่าเชื้อชิ้นส่วนเนื้อเยื่อของหญ้าทะเลที่เหมาะสมในการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อหญ้าชะเงาเต่า (Thalassia hemprichii) จากการศึกษาการฟอกฆ่าเชื้อชิ้นส่วนใบของหญ้าชะเงาเต่า (Thalassia hemphichii) จำนวน 7 วิธี พบว่าชิ้นส่วน ใบของหญ้าชะเงาเต่า สิ่งทดลองที่เหมาะสมที่สุดคือสิ่งทดลองที่ 3 คือฟอกฆ่าเชื้อด้วยSodiumHypochlorite as available Chlorine 6%w/w ความเข้มข้น 20 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 15 นาที มีการรอดชีวิต 8.00±0.41 เปอร์เซ็นต์สำหรับชิ้นส่วนใบ ชิ้นส่วนโคนใบของหญ้าชะเงาเต่า (Thalassia hemphichii) พบว่าสิ่งทดลองที่เหมาะสมที่สุดคือสิ่งทดลองที่ 3 ความเข้มข้น 20 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 15 นาที มีการรอดชีวิต 7.00±0.44 เปอร์เซ็นต์ และชิ้นส่วนลำต้นใต้ดินของหญ้าชะเงาเต่า พบว่าสิ่งทดลองที่เหมาะสมที่สุดคือสิ่งทดลองที่ 3 ความเข้มข้น 20 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 15 นาที มีการรอดชีวิต 6.33±0.50 เปอร์เซ็นต์ ดังตารางที่ 1 พบว่าการฟอกฆ่าเชื้อด้วย Sodium Hypochlorite as available Chlorine 6% w/w ความเข้มข้น 20 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 15 นาที เป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพสูงสุด