วารสารเทคโนโลยีและนวัตกรรมเกษตร ปีที่ 2 ฉบับที่ 2

29 ฤทธิ์ในการต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดหยาบของกัญชาสายพันธุ์ต่างประเทศ (Cluster Bomb) และสายพันธุ์ไทย (Thai Stick) Journal of Technology and Agricultural Innovation Vol. 2 No. 2 ( July - December 2024 ) (Thai Stick) Cannabis sativa L. ด้วยวิธี 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) assay, Ferric reducing antioxidant power (FRAP) และเปรียบเทียบปริมาณฤทธิ์ต้าน lipid peroxidation ด้วยวิธี TBARs Assay เพื่อเป็นข้อมูลพิจารณาการใช้สายพันธุ์กัญชาที่สอดคล้องกับบริบทการควบคุมและการใช้ตามมาตรฐาน การควบคุมของสาธารณสุข ผนวกเข้ากับบริบทของสิ่งแวดล้อมและการเกษตรเพื่อที่จะพัฒนาสารสกัด จากกัญชาเชิงในอุตสาหกรรม หรือเป็นข้อมูลพื้นฐานที่ช่วยในการปรับปรุงคุณภาพ และปริมาณของ สารสำ คัญในแต่ละชนิดของสายพันธุ์ในอนาคต วัสดุ อุปกรณ์ และวิธีการ (Material and Methodology) การเตรียมตัวอย่าง ตัวอย่างกัญชาได้มาจากฟาร์มสวนกระท่อม ดร. กิ๊ก เพาะปลูกที่ อำ เภอบางระกำ จังหวัดพิษณุโลก พืชทั้งสองชนิดปลูกเมื่อเดือนสิงหาคม พ.ศ. 2565 และเก็บเกี่ยวในช่วง พฤศจิกายน พ.ศ. 2565 กัญชา ทั้งสองชนิดมีอายุประมาณ 4 เดือนก่อนนำ มาทำ การทดลอง โดยแยกส่วนลำ ต้น ดอก และใบของกัญชา ทั้งสองชนิดมาตากแห้งธรรมชาติเป็นเวลา 5 วัน จากนั้นนำ กัญชาที่แห้งแล้ว 50 กรัมผสมกับตัวทำ Dichloromethane 100 mL และตั้งทิ้งไว้เป็นเวลา 2 วัน นำ ไปกรองด้วยกระดาษกรองเบอร์ 1 จากนั้น นำ สารสกัดที่ได้มาระเหยในตู้ Fume Hood ละลายสารสกัดตัวอย่างกัญชาอีกครั้งด้วยเมทานอล ให้ได้ ปริมาณ 1 มิลลิกรัมต่อ 1 mL และเก็บตัวอย่างสารสกัดเพื่อใช้ในการวิเคราะห์ต่อไป ละลาย การทดสอบฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระด้วยวิธี DPPH radical scavenging activity การทดสอบฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ โดยเตรียมสารละลาย DPPH เข้มข้น 0.6 มิลลิโมลาร์ โดยชั่ง สาร DPPH หนัก 0.06 กรัม ละลายด้วยเมทานอลลงในขวดวัดปริมาตรขนาด 100 mL ปรับปริมาตรให้ พอดีด้วยเมทานอล โดยมีวิธีการดังนี้ ผสมสารสกัดที่มีความเข้มข้นต่าง ๆ 0-1000 µg/mL กับสารละลาย 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl radical (DPPH) ในเมทานอลที่มีความเข้มข้น 0.6 มิลลิโมลาร์ 1:1 วางไว้ในที่มืดที่อุณหภูมิห้อง เป็นเวลา 30 นาทีวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 510 นาโน ด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลต (microplate reader) รายงานผลเป็นค่าร้อยละการยับยั้งอนุมูลอิสระของ สารสกัดที่ความเข้มข้นต่าง ๆ โดยคำ นวณจากสมการดังนี้ อัตราส่วน เมตร % inhibition = [1-(OD sample/OD blank)] × 100 การทดสอบฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดด้วยวิธี Ferric reducing antioxidant power (FRAP) assay Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) โดยใช้ FRAP เป็นอนุมูลอิสระ เริ่มจากปิเปต สารสกัดตัวอย่างมีความเข้มข้นต่าง ๆ 0-1000 µg/mL ปริมาตร 20 ไมโครลิตร ใส่ใน 96 well plate เติมสารละลาย FRAP ปริมาตร 180 ไมโครลิตร บ่มที่อุณหภูมิห้องในที่มืดเวลา 30 นาที วัดค่าการดูด กลืนแสงที่ความยาวคลื่น 593 นาโนเมตร สำ หรับ blank ใช้เมทานอลแทนสารสกัดตัวอย่าง และแสดง ค่าเป็นสารมาตรฐานรายงานผลในหน่วยของ ปริมาณ Fe 2+