767
üĉ
íĊ
Öćøüĉ
ÝĆ
÷
1. ÿëćîìĊę
ĒúąÖćøđÖĘ
ïêĆ
üĂ÷Š
ćÜ
êĆ
üĂ÷Š
ćÜĒöŠ
ðĎ
ìĊę
öĊ
ĕ׊
îĂÖÖøąéĂÜǰ ĕéš
ÝćÖÖćøàČĚ
ĂÝćÖßćüðøąöÜóČĚ
îïš
ćîǰ ïøĉ
đüèêĞ
ćïúÙúĂÜđÙĊ
÷îǰ ĂĞ
ćđõĂêąÖĆę
üìčŠ
Ü
ÝĆ
ÜĀüĆ
éóĆ
ÜÜćǰ ÝĞ
ćîüîǰ ǰ êĆ
ü ĒöŠ
ðĎ
ÝąëĎ
ÖúĞ
ćđúĊ
÷ÜúĞ
ćđúĊ
÷ÜĔîÖúŠ
ĂÜēôöìĊę
öĊ
îĚĞ
ćìąđúÿąĂćéǰ ĒúąĔĀš
ĂćÖćýêúĂéđüúćǰ Ēúš
üîĞ
ćöćóĆ
Ö
ĕüš
ìĊę
ïŠ
ĂđóćąđúĊĚ
÷ÜÿĆ
êüŤ
îĚĞ
ć×ĂÜßćüðøąöÜĔîìš
ĂÜëĉę
îǰ đóČę
ĂĔĀš
ĒöŠ
ðĎ
ðøĆ
ïêĆ
üĕéš
ÖĆ
ïÿõćüąéĆ
ÜÖúŠ
ćüǰ đîČĚ
Ăđ÷Čę
Ă×ĂÜĒöŠ
ðĎ
ÝąëĎ
ÖđÖĘ
ïÝćÖ×ć
üŠ
ć÷îĚĞ
ćǰ ēé÷ÖćøêĆ
éðúć÷×ćüŠ
ć÷îĚĞ
ćĂĂÖĒúš
üĒÖąđĂćÿŠ
üîđîČĚ
ĂöćĒߊ
Ĕîǰ
Ethanol ĒúąđÖĘ
ïĕüš
ìĊę
Ăč
èĀõĎ
öĉ
Āš
ĂÜđóČę
ĂøĂÖćøÿÖĆ
é
éĊ
đĂĘ
îđĂĒúąêøüÝÿĂïÝĊ
ēîĕìðş
êŠ
Ăĕð ÿĞ
ćĀøĆ
ïĕ׊
îĂÖÖøąéĂÜìĊę
ĕéš
øĆ
ïÖćøñÿöĒúš
üÝąđÖĘ
ïøüïøüöÝćÖǰ 9 ïøĉ
đüèïîÝĆ
ïðŗŪ
Ü éĆ
Ü
õćóìĊę
1 ēé÷đÖĘ
ïïøĉ
đüèúą 0.9 ÖøĆ
öǰĒúš
üđÖĘ
ïøĆ
Öþćĕüš
Ĕîǰ
Ethanol đóČę
ĂîĞ
ćöćĔßš
ĔîÖćøÿÖĆ
éÿćøóĆ
îíč
ÖøøöĒúąêøüÝÿĂï
ÝĊ
ēîĕìðş
êŠ
Ăĕð
õćóìĊę
1
ĒÿéÜïøĉ
đüèìĊę
đÖĘ
ïĕ׊
ðĎ
ïîÝĆ
ïðŗŪ
Ü
ǰÖćøðäĉ
ïĆ
êĉ
ÜćîìćÜéš
ćîĂèĎ
ßĊ
üēöđúÖč
ú
ǰ ÖćøÿÖĆ
ééĊ
đĂĘ
îđĂǰ ìĞ
ćÖćøÿÖĆ
ééĊ
đĂĘ
îđĂ×ĂÜðĎ
öš
ćìĆĚ
ÜÿŠ
üîìĊę
đðŨ
îĕ׊
ðĎ
ĒúąÝćÖđîČĚ
Ăđ÷Čę
Ă×ĂÜĒöŠ
ðĎ
éš
ü÷üĉ
íĊ
ǰ Salting out
[17] ēé÷ĕ׊
ðĎ
ÿÖĆ
éøüöÖĆ
îĔßš
ĕ׊
Ýč
éúąǰ0.03 ÖøĆ
öǰÿĞ
ćĀøĆ
ïĒöŠ
ðĎ
Ĕßš
đîČĚ
Ăđ÷Čę
Ă×ćüŠ
ć÷îĚĞ
ćǰ0.5 ÖøĆ
ö Ùč
èõćóĒúąðøĉ
öćè×ĂÜéĊ
đĂĘ
îđĂìĊę
ĕéš
ëĎ
ÖêøüÝÿĂïéš
ü÷üĉ
íĊ
ĂąÖćēøÿđÝúĂĉ
đúĘ
Öēêøēôđøàĉ
ÿǰ Agarose gel electrophoresis) ÖŠ
ĂîìĊę
Ýąđך
ćÿĎŠ
ÖøąïüîÖćøìĞ
ćǰ PCR
êŠ
Ăĕð
ǰ ÖćøìĞ
ćðäĉ
Öĉ
øĉ
÷ć PCR (Polymerase Chain Reaction) đóČę
Ăđóĉę
öðøĉ
öćèßĉĚ
îÿŠ
üî×ĂÜéĊ
đĂĘ
îđĂǰ ēé÷Ĕßš
ǰ
microsatellite markers ÿĞ
ćĀøĆ
ïǰ
1PSUVOVTǰQFMBHJDVT
àċę
Üĕéš
öĊ
ÖćøóĆ
çîćĕüš
Ēúš
ü [12] ĔîÖćøýċ
ÖþćÙøĆĚ
ÜîĊĚ
Ĕßš
microsatellite
markers ìĆĚ
ÜĀöéǰ3 ēúÙĆ
ÿ ÙČ
ĂǰDOFBSC25, DOFBSC26 ĒúąǰDOFBSC29 àċę
ÜëĎ
Öêĉ
éôĎ
úĂĂđøÿđàîêŤ
ǰĕüš
ìĊę
éš
ćîðúć÷ǰ ’ ×ĂÜ
ĒêŠ
úąĕóøđöĂøŤ
ǰ êćøćÜìĊę
ǰ ǰēé÷ðäĉ
Öĉ
øĉ
÷ćǰpolymerase chain reaction (PCR) ðøĉ
öćè 20
P
l öĊ
ĂÜÙŤ
ðøąÖĂïêŠ
ćÜėéĆ
ÜîĊĚ
ÙČ
Ăǰ
template DNA 10-20 ng forward Ēúą reverse primer Ă÷Š
ćÜúąǰ0.4 pmol, KAPA
5BR
ready mix (biosystem) 10
P
l Ēúąǰsterile ddH
2
O 7.4
P
l ĒúąîĞ
ćìĆĚ
ÜĀöéöćđך
ćÿĎŠ
ÖøąïüîÖćøìĞ
ćǰPCR (PCR cycle) àċ
ę
ÜðøąÖĂïéš
ü÷95
q
C 5 îćìĊ
ǰ1
øĂï êćöéš
ü÷ǰ ǰøĂïǰ×ĂÜ 95
q
C 45 üĉ
îćìĊ
, -
q
C ×ċĚ
îĂ÷ĎŠ
ÖĆ
ïÿõćüąìĊę
đĀöćąÿöÿĞ
ćĀøĆ
ïĒêŠ
úąĕóøđöĂøŤ
êćøćÜìĊę
1 45
üĉ
îćìĊ
ǰĒúąǰ72
q
C 45 üĉ
îćìĊ
ǰĒúš
üêćöéš
ü÷ ǰøĂïǰìĊę
72
q
C 10 îćìĊ
ñúñúĉ
ê PCR ìĊę
ĕéš
ëĎ
Ö÷š
Ăöéš
ü÷ĕàđïĂøŤ
ÖøĊ
îǰ(sybergreen
staining) Ēúš
üîĞ
ćĕðêøüÝÿĂï éš
ü÷üĉ
íĊ
ĂąÖćēøÿđÝúĂĉ
đúĘ
Öēìøēôđøàĉ
ÿ ēé÷Ĕßš
1.5% w/v) agarose gel ÖŠ
ĂîÿŠ
ÜĕðêøüÝÿĂïÝĊ
ēîĕìðş
éš
ü÷đÙøČę
ĂÜǰǰautomated genotyping (ABI3730XLs) ìĊę
ǰMacrogen Inc.
(Korea -
