เอกสารการประชุมวิชาการและเสนอผลงานวิจัย มหาวิทยาลัยทักษิณ ครั้งที่ 19 2552 - page 318

„µ¦ž¦³»¤ª·µ„µ¦Â¨³Áœ°Ÿ¨Šµœª·‹´¥ ¤®µª·š¥µ¨´¥š´„¬·– ‡¦´ÊŠš¸É 19 ž¦³‹Îµže 2552
£µ¡š¸É 4 „µ¦šÎµ°·Á¨‡Ãš¦Ã¢¦¸ Ž· ĜÁ‹¨°³„µÃ¦‡ªµ¤Á o¤ oœ 2 % °Š PCR product š¸ÉčoÅ¡¦Á¤°¦r‹ÎµÁ¡µ³„´¨Îµ—´
Á °Š 5/ - pSUMO vector (M= 50 bp DNA ladder; 1= pSUMO-Hb REF)
„µ¦´ŠÁ‡¦µ³®r¦¸‡°¤·ÂœœšrÞ¦˜¸ œ HbREF Ĝ E. coli BL21 plus (DE3) RIL
Á¤ºÉ °œÎµ˜³„°œÁºÊ° E. coli BL21 plus (DE3) RIL š¸É¤¸¡¨µ¤·— pSUMO-HbREF Ž¹ÉŠÁ¨¸Ê¥ŠÁŽ¨¨rš¸É °»–®£¼¤·
37 qC Áž}œÁª¨µ 12 ´ÉªÃ¤Š Ĝ£µ¡ uninduced ¨³ induced —oª¥ IPTG 0.05 mM, 0.1 mM ¨³ 0.2 mM ¤µÁ˜¦¸¥¤
µ¦¨³¨µ¥Ãž¦˜¸œ—oª¥ª·›¸ Freeze-thaw lysis ¨³ª·Á‡¦µ³®rÞ¦˜¸œ—oª¥ SDS-PAGE ¡ªnµ ‡ªµ¤Á o¤ oœ °Š IPTG
0.1 mM µ¤µ¦™Á®œ¸É¥ªœÎµ„µ¦´ ŠÁ‡¦µ³®r¦¸‡°¤·Âœœšr Þ¦˜¸œÅ—o—¸š¸É »— ˜nÞ¦˜¸œ°¥¼nĜnªœ °Š pellet cell —Š
ªnµÁž}œ inclusion body (£µ¡š¸É 5) Ž¹ÉŠ¦¸ ‡°¤·ÂœœšrÞ¦˜¸œš¸É—¸ µ¤µ¦™œÎµÅžšÎµÄ®o¦· »š›·ÍŗoŠn µ¥‹³˜o°Š°¥¼n Ĝ¦¼ž °Š
soluble protein ‹¹ ŠÅ—oÁ¨¸Ê¥ŠÁŽ¨¨r£µ¥Äœ£µª³˜nµŠÇ š¸ÉÁ®¤µ³¤˜n°„µ¦Á®œ¸É¥ªœÎ µÄ®oŗo soluble protein ×¥Á¨¸Ê¥ŠÁŽ¨¨r
Ĝ°µ®µ¦š¸É¤¸ IPTG ‡ªµ¤Á o¤ oœ 0.1 mM š¸É°»–®£¼¤· 15qC, 25qC ¨³ 37qC Áž}œÁª¨µ 12 ´ÉªÃ¤Š ¡ªn µÁŽ¨¨r µ¤µ¦™
´ŠÁ‡¦µ³®r ¦¸‡°¤·ÂœœšrÞ¦˜¸œÅ—oš¸É°»–®£¼¤· 37qC (Ťn ŗo—Š o °¤¼¨) nªœš¸É°»–®£¼¤· 15qC ¨³ 25qC Ťn ¤¸„µ¦
´ŠÁ‡¦µ³®r ¦¸‡°¤·ÂœœšrÞ¦˜¸œ (£µ¡š¸É 6 ¨³ 7) —ŠªnµÁºÊ ° E. coli BL21 plus (DE3) RIL µ¤µ¦™´ŠÁ‡¦µ³®r¦¸
‡°¤·Âœœšr Þ¦˜¸œ °Š¥¸œ REF ŗo —¸š¸É °»–®£¼¤· 37 qC ˜n¦¸‡°¤·ÂœœšrÞ¦˜¸œš¸Éŗo¥´Š‡ŠÄœ¦¼ž °Š inclusion body
‹¹ŠÁ¨¸Ê¥ŠÁŽ¨¨r Ĝ°µ®µ¦š¸É¤¸ IPTG ‡ªµ¤Á o¤ oœ 0.1 mM š¸É°»–®£¼¤· 37qC Áž}œÁª¨µ 3 ´ÉªÃ¤Š, 6 ´É ªÃ¤Š ¨³ 12 ´ÉªÃ¤Š
¡ªnµ¤¸„µ¦´ŠÁ‡¦µ³®r¦¸‡°¤·ÂœœšrÞ¦˜¸œÅ—o—¸š¸É » —š¸ÉÁª¨µ 6 ´ÉªÃ¤Š ¨³¦¸‡°¤·ÂœœšrÞ¦˜¸œš¸Éŗo¥´Š‡Š°¥¼nĜ¦¼ž
°Š inclusion body (£µ¡š¸É 8) „µ¦´ŠÁ‡¦µ³®r¦¸‡°¤·Âœœšr°Š¥¼‡µ¦· ð˜ÄœÂ‡š¸Á¦¸ ¥nªœÄ®n‹³Å—oÞ¦˜¸œÄœ¦¼ž
inclusion body Ž¹ÉŠ°—‡¨o°Š„´Ÿ¨„µ¦š—¨°Š °Š Rao ¨³‡–³ (2009) š¸É ´ŠÁ‡¦µ³®r¦¸‡°¤·ÂœœšrÞ¦˜¸œ Apaf-1
°Š‡œÄœ E. coli BL21 DE3 ¨³Á¨¸Ê¥ŠÁŽ¨¨rĜ£µª³˜n µŠÇ š¸ÉÁ®¤µ³¤˜n°„µ¦Á„·— soluble protein ˜n„Èŗo¦¸‡°¤
· œšrÞ¦˜¸œÄœ¦¼ž inclusion body ÁnœÁ—¸ ¥ª„´œ
M 1
500 bp
200 bp