µ¦¦³»
¤ª·
µµ¦Â¨³Á°¨µª·
´
¥ ¤®µª·
¥µ¨´
¥´
¬·
¦´Ê
¸É
19 ¦³Î
µe
2552
®¨°¨³ 1 mL Ã¥®¨°¸É
1 Ťn
Á·
¤ IPTG ®¨°¸É
2-4 induced Ã¥Á·
¤ IPTG ¸É
ªµ¤Á
o
¤
o
0.1 mM µ´Ê
Á¨¸Ê
¥
ÁºÊ
°Åªo
¸É
°»
®£¼
¤·
37
q
C Á}
Áª¨µ 3 ´É
ªÃ¤, 6 ´É
ªÃ¤ ¨³ 12 ´É
ªÃ¤ ¨o
ªÎ
µÁºÊ
°¤µ®¤»
Á®ª¸É
¥¸É
ªµ¤Á¦È
ª 10,000x
g
Á}
Áª¨µ 10 µ¸
¨³ÁÈ
³°ÁºÊ
°Åªo
¸É
°»
®£¼
¤·
-20
q
C µ´Ê
¹
Á¦¸
¥¤Ã¦¸
µn
ªn
µÇ ¨³¦ª°
æ¸
o
ª¥ SDS-PAGE µ¤ª·
¸
µ¦¸É
¨n
µªÄ°o
¨µ¦ª·
´
¥Â¨³°£·
¦µ¥¨
µ¦Ã¨ ¨³¦o
µ¦¸
°¤·
Âr
¸
Á°È
Á°Î
µ®¦´
´
Á¦µ³®r
æ¸
REF
µµ¦°°ÂÅ¡¦Á¤°¦r
Î
µ®¦´
´
Á¦µ³®r
cDNA
°¥¸
REF µÊÎ
µ¥µ
°¥µ¡µ¦µ ¨³Ã¨Á
o
µ
pGEM-T Easy vector ª·
Á¦µ³®r
¨Î
µ´
Á¨³Á¦¸
¥Á¸
¥´
¨Î
µ´
瀵
o
°¤¼
¨ (GenBank) ¡ªn
µ¨Î
µ´
Á
homology ´
¥¸
REF Ä¥µ¡µ¦µÁn
µ´
100 % (GenBank accession no. AY120685) Ã¥¤¸
¨Î
µ´
Á¦°¨»
¤
n
ª
° 5
/
-non coding region ¨³ 3
/
-non coding region
°¥¸
REF Á¤ºÉ
°Äo
Á}
Âĵ¦´
Á¦µ³®r
coding
region
°¥¸
REF ¡ªn
µµ¤µ¦´
Á¦µ³®r
DNA Åo
Á¡¸
¥ÂÁ¸
¥ª
µ¦³¤µ 450 bp (£µ¡¸É
3) °¨o
°
´
¦·
Áª¨Î
µ´
Á¸É
¦°¨»
¤ coding region
° ¥¸
REF Á¤ºÉ
°ÁºÉ
°¤Á
o
µ´
pSUMO vector ¨³Á¨ºÉ
°¥o
µ¥Á
o
µÄ
第r
¸
Á¦¸
¥
E.coli
BL21 plus (DE3) RIL Î
µÃ¨¸É
´
笼
°Åo
ÅÁ¦¸
¥¤¡¨µ¤·
¨³ª·
Á¦µ³®r
DNA
° REF
¸É
缃
°¤Á
o
µ´
¡¨µ¤·
o
ª¥Á·
PCR Ã¥Äo
Å¡¦Á¤°¦r
Î
µÁ¡µ³´
¨Î
µ´
Á 5
/
- pSUMO vector ¨³ DNA
°
REF ¡ªn
µÅo
 DNA
µÁ¸
¥ª´
¸É
Äo
°°ÂÅ¡¦Á¤°¦r
(¦¼
¸É
4) Á¤ºÉ
°ª·
Á¦µ³®r
®µ¨Î
µ´
Á¡ªn
µ¨Î
µ´
Á
° pSUMO vector Á¦¸
¥¨Î
µ´
n
°ÁºÉ
°´
¨Î
µ´
Á
° REF ªn
µ pSUMO vector ÁºÉ
°¤n
°´
¥¸
REF Ä
Î
µÂ®n
° open reading frame ¸É
¼
o
°
£µ¡¸É
3 µ¦Î
µ°·
Á¨Ã¦Ã¢¦¸
·
ÄÁ¨°³µÃ¦ªµ¤Á
o
¤
o
2 %
° cDNA ¥¸
REF (M=50 bp DNA ladder)
M REF
500 bp