การประชุมวิชาการและผลงานวิจัย มหาวิทยาลัยทักษิณ ครั้งที่ 17 2550 - page 507

3
และพื้นที่สันทรายชายฝงทะเล (Sridith and Laongpol, 2002).แตปจจุบั นพบโทะไดนอยลง จังหวัดสงขลาและพัทลุง
เป นพื้นที่ที่ มีโทะกระจายพันธุอยู งานวิจัยนี้จึงสนใจศึกษาความแปรผันทางพั นธุกรรมของโทะในจังหวัดสงขลาและ
พั ทลุงโดยการตรวจสอบดวยเครื่ องหมายโมเลกุลอารเอพีดี (Random Amplified Polymorphic DNA : RAPD)
ผลการศึกษาครั้ งนี้จะใชเปนข อมูลพื้นฐานทางพั นธุกรรมในการคัดเลือกและปรับปรุงพั นธุพื ช อีกทั้งเพื่อเปนข อมูลในการ
สงเสริมและอนุรักษโทะใหคงอยูในประเทศไทย
อุปกรณและวิธีการ
เก็บตัวอย างใบโทะจํานวน 30 ตั วอยาง จาก 5 อําเภอของจังหวัดสงขลา และ5 อําเภอของจังหวั ดพัทลุง
รวม 10 อําเภอ (ตารางที่ 1 และภาพที่ 1 ) สกัดดีเอ็นเอโดยใชวิธี CTAB (Porebski et al ., 1997) แลวเพิ่มปริมาณ
ดีเอ็นเอดวยเทคนิคอารเอพีดีโดยใช ไพรเมอร 25 ไพรเมอร สภาวะที่เหมาะสมในการทําพีซี อารคือ ปริมาณดีเอ็นเอ
ประมาณ 6 ng สารละลาย MgCl2 2.5 mM dNTPs 0.2 mM Primer 0.3 pmole Taq polymerase 0.5 U มี
โปรแกรมการทํางานของพีซีอารคือ ขั้นตอน denature อุณหภูมิ 93 oC ขั้นตอน annealing 35 oC ขั้นตอน extension
72 oC ทํ าซ้ําทั้งสามขั้ นตอน 35 รอบ (สุรินทร, 2545) และวิเคราะหความสัมพันธทางพันธุกรรมดวยโปรแกรม PHYLIP
(Felsenstein, 1995)
ตารางที่ 1 แสดงสถานที่เก็บโทะและสัญลักษณที่ใชแทนการเรี ยกชื่อโทะจากแตละแหลง
ผลการวิจัยและอภิปรายผล
ผลการทําอารเอพีดีโดยใชไพรเมอรจํานวน 25ไพรเมอร พบ 13 ไพรเมอรที่สามารถเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอ
ได และคัดเลือกไพรเมอร ที่ใหแถบดีเอ็นเอชัดคมไดจํานวน 9 ไพรเมอร คือ AA02 ,AA03, AA04, AA11, AA14,
AA15, AA17, AA19 และ OPE11 หลังการทําพี ซีอาร แลวสามารถเห็นแถบดี เอ็นเอชัดเจน (Major band) และแถบ
ดีเอ็นเอที่เปนแถบจาง (Minor band) จากการทําพี ซีอาร โทะ 3 ตัวอยางจากแหลงเดี ยวกันของอําเภอหาดใหญ และ
อําเภอบางกล่ํา โดยใชไพรเมอร AA17 และ AA03 ตามลําดับ (ภาพที่ 2) พบวาไมมีความแตกตางของแถบดี เอ็นเอ
สายพันธุโทะ สัญลักษณแทนการเรียกชื่อ
1. ต. บานเหรียง อําเภอควนเนียง จั งหวัดสงขลา SK
2. ต. ควนพระ อํ าเภอบางกล่ํา จังหวัดสงขลา SB
3. ต.ท าฉมวง อําเภอรัตภูมิ จังหวัดสงขลา SR
4. ต. หาดแก ว อําเภอสิงหนคร จังหวัดสงขลา SS
5. ต. ทุงตําเสา อําเภอหาดใหญ จังหวัดสงขลา SH
6.ต.ควนขนุน อํ าเภอเขาชัยสน จังหวัดพัทลุง PK
7.ต. ปลักปอม อํ าเภอตะโหมด จังหวัดพัทลุง PT
8. ต.ฝาละมี อําเภอปากพยูน จังหวัดพัทลุง PU
9. ต.ปาบอน อําเภอปาบอน จังหวัดพัทลุง PB
10.ต.ปาพะยอม อําเภอปาพะยอม จังหวัดพัทลุง PY