114
°»
¦r
¨³ª·
¸
µ¦
µ¦Â¥ÊÎ
µ¤´
¤³¡¦o
µªÂ¨³µ¦´
®¥µ
Äo
¤³¡¦o
µª
¼
3 ·
覴
¤ ´
o
ª¥Á¦ºÉ
°¸
¦³Å±Ã¦¨·
åŤn
¤ÊÎ
µ³Åo
ÊÎ
µ³·
Á
o
¤
o
¦³¤µ
1750±150 ml ¨o
ªÎ
µÅÁ¦·
¢d
ªr
¸É
ªµ¤Á¦È
ª 3300×g Áª¨µ 30 µ¸
¸É
°»
®£¼
¤·
4
o
C ÊÎ
µ¤´
¤³¡¦o
µª³Â¥´
ªÁ}
°Â
È
´Ê
Â¥
°Â
È
°°µ´Ê
µ¦´
®¥µo
µ¨n
µ ¦°µ¦´
®¥µ (crude) ´Ê
¨n
µn
µ¦³µ¬
¦° ¨o
ª³Åo
µ¦´
®¥µ¸É
¤¸
¸
Á®¨º
°
»n
n
ª
°Â
È
Á¤ºÉ
°´Ê
·Ê
Ūo
¸É
°»
®£¼
¤·
®o
°Á}
Áª¨µ 2 ª´
³Åo
ÊÎ
µ¤´
¤³¡¦o
µª¦·
»
·Í
Â¥´
ª°¥¼n
´Ê
Â¥ÊÎ
µ¤´
¸É
Åo
o
ª¥µ¦¦°n
µ¦³µ¬¦°
µ¦«¹
¬µÁ¢Å°³Â¦¤(phase diagram) ĵ¦Â¥´Ê
¦³®ªn
µ PEG ¨³Á¨º
° trisodium citrate
«¹
¬µÃ¥Äo
µ¦´
µ(5% w/v) Á¡ºÉ
°Ä®o
n
µ¥n
°µ¦´
Áµ¦Â¥´Ê
Ã¥¨³¨µ¥ PEG ¸É
¤¸
µÃ¤Á¨»
¨
1500 ¨³ 6000 Ä®o
¤¸
Á°¦r
ÁÈ
r
´Ê
Ân
5 – 40 % ĵ¦´
µÁ¦·É
¤o
10 ml Î
µµ¦Á
¥n
µÄ®o
Á
o
µ´
¨o
ªn
°¥ Ç Á·
¤
笼
°
trisodium citrate ¨Äµ¦¨³¨µ¥¸É
¨°Áª¨µ¸
¨³o
°¥ Ç µ¦¨³¨µ¥Á¦·É
¤Â¥´Ê
Î
µ
o
°¤¼
¨¸É
Åo
¤µÁ
¸
¥
Á¢Å°³Â¦¤¦³®ªn
µÁ°¦r
ÁÈ
r
° PEG ¨³Á¨º
° trisodium citrate
µ¦«¹
¬µµ¦Â¥Á°Å¤r
ŨÁµµ¦´
®¥µo
ª¥Á·
ATPS Ã¥Äo
Á¢Å°³Â¦¤
Äo
µ¦´
®¥µ¸É
Åo
®¨´
µµ¦Á¦·
¢d
ªr
Â¥µÊÎ
µ¤´
¤³¡¦o
µª Ã¥Î
µÄ®o
Á
o
¤
o
o
ª¥µ¦¦³Á®¥Â
¨ªµ¤´
(rotary evaporation) µ´Ê
¨³¨µ¥ PEG 1500 ¨³ PEG 6000 ´
Á°¦r
ÁÈ
r
¸É
Î
µ®Â¨³¦·
¤µÁ¨º
°
trisodium citrate µ¤Á¢Å°³Â¦¤ Ân
Īn
µ¨³¨µ¥Á
o
µ´
®¤ Î
µÅÁ¦·
¢d
ªr
¸É
3300×g Áª¨µ 15 µ¸
¸É
°»
®£¼
¤·
4
o
C Â¥´Ê
¨³¨n
µ°°µ´
¨o
ªÎ
µÅ«¹
¬µ¦·
¤µÃ¦¸
¨³Á°Å¤r
ŨÁn
°Å
µ¦«¹
µn
µÂ°·
ª·
¸Ê
°Á°Å¤r
ŨÁ
n
µÂ°·
ª·
¸Ê
°Á°Å¤r
ŨÁ (modified Kilcawley
et al
. 2002) Ã¥Äo
p
-nitrophenylplamitate Á}
´
Á¦ n
¤Á°Å¤r
¸É
°»
®£¼
¤·
40
o
C Á}
Áª¨µ 30 µ¸
¸É
pH 8.5 Î
µÅª´
n
µµ¦¼
¨º
¸É
410 nm ¨o
ªÁ¸
¥
´
¦µ¢¤µ¦µ
°
p
-nitrophenol n
ªªµ¤Á
o
¤
o
0.0-0.1 ôg Ã¥Î
µ®Ä®o
1 ®n
ª¥
°Á°Å¤r
ŨÁ®¤µ¥¹
¦·
¤µÁ°Å¤r
¸É
Á¦n
·
·
¦·
¥µµ¦¨µ¥¡´
³Á°Á°¦r
°
p
-nitrophenylplamitate Åo
Á}
p
-nitrophenol
1 ômol n
°µ¸
£µ¥Äo
£µª³¸É
Î
µ®
µ¦®µ¦·
¤µÃ¦¸
¨³«¹
¬µ¦¼
Âæ¸
o
ª¥Á·
ÃÁ¸
¥¤ÃÁ·
¨´
¨Á¢ ¡°¨·
°³¦·
¨µÅ¤r
Á¨ °·
Á¨Ã¦-
⨷
·
(SDS-PAGE)
µ¦®µ¦·
¤µÃ¦¸
Äo
ª·
¸
Bradford(1976) ª´
n
µµ¦¼
¨º
¸É
595 nm ¨o
ªÁ¸
¥´
¦µ¢ BSA
¤µ¦µ¸É
ªµ¤Á
o
¤
o
Än
ª 0-100 ôg ¨³«¹
¬µ¦¼
ÂÂæ¸
o
ª¥Á·
SDS-PAGE Äo
3% straking gel
¨³ 12 % separating gel ¥o
°¤o
ª¥ Coomassie brilliant blue R-250 ´
ª°¥n
µÃ¦¸
ĵ¦´
®¥µÂ¨³´Ê
笼
°
Î
µµ¦¤´
sample buffer °´
¦µn
ª 1:3 
ª°¥n
µ 5ôl n
ªÃ¦¸
Ä´Ê
PEG ¤o
ª¥ sample buffer Ä
°´
¦µn
ª 2:1
ª°¥n
µ 30ôl
µ¦«¹
¬µªµ¤n
°°»
®£¼
¤·
ĵ¦Î
µµ
°Á°Å¤r
ŨÁ
«¹
¬µÄn
ª°»
®£¼
¤·
´Ê
Ân
50-90
o
C Ã¥«¹
¬µÁ°Å¤r
Ä´Ê
笼
°Â¨³ PEG Á¸
¥´
µ¦´
®¥µn
¤¸É
°»
®£¼
¤·
n
µ Ç Á}
Áª¨µ 1 ¤. ·Ê
Įo
Á¥È
¸É
°»
®£¼
¤·
®o
°Â¨o
ªÎ
µµ¦ª´
n
µÂ°·
ª·
¸Ê
Á°Å¤r
n
°Å