full2010.pdf - page 152

114
°»
ž„¦–r
¨³ª·
›¸
„µ¦
„µ¦Â¥„œÊÎ
µ¤´
œ¤³¡¦o
µªÂ¨³µ¦„´
—®¥µ
čo
¤³¡¦o
µª…¼
— 3 „·
脦´
¤ „´
——o
ª¥Á‡¦ºÉ
°Š¸
¦³Å±Ã—¦¨·
„ץŤn
Ÿ¤œÊÎ
µ‹³Å—o
œÊÎ
µ„³š·
Á…o
¤…o
œž¦³¤µ–
1750±150 ml ¨o
ªœÎ
µÅžÁŽœ˜¦·
¢d
ª‹r
š¸É
‡ªµ¤Á¦È
ª 3300×g Áª¨µ 30 œµš¸
š¸É
°»
–®£¼
¤·
4
o
C œÊÎ
µ¤´
œ¤³¡¦o
µª‹³Â¥„˜´
ªÁž}
œ
…°ŠÂ…È
Š´Ê
œœ Â¥„…°ŠÂ…È
Š°°„‹µ„´Ê
œµ¦„´
—®¥µ—o
µœ¨n
µŠ „¦°Šµ¦„´
—®¥µ (crude) ´Ê
Ϭn
µŠŸn
µœ„¦³—µ¬
„¦°Š ¨o
ª‹³Å—o
µ¦„´
—®¥µš¸É
¤¸
¸
Á®¨º
°Š…»n
œ n
ªœ…°ŠÂ…È
ŠÁ¤ºÉ
°˜´Ê
Šš·Ê
ŠÅªo
š¸É
°»
–®£¼
¤·
®o
°ŠÁž}
œÁª¨µ 2 ª´
œ ‹³Å—o
œÊÎ
µ¤´
œ
¤³¡¦o
µª¦·
»
š›·Í
Â¥„˜´
ª°¥¼n
´Ê
œœ Â¥„œÊÎ
µ¤´
œš¸É
ŗo
—o
ª¥„µ¦„¦°ŠŸn
µœ„¦³—µ¬„¦°Š
„µ¦«¹
„¬µÁ¢Å—°³Â„¦¤(phase diagram) Ĝ„µ¦Â¥„´Ê
œ¦³®ªn
µŠ PEG ¨³Á„¨º
° trisodium citrate
«¹
„¬µÃ—¥Äo
µ¦„´
—µ(5% w/v) Á¡ºÉ
°Ä®o
Šn
µ¥˜n
°„µ¦´
ŠÁ„˜„µ¦Â¥„´Ê
œ ×¥¨³¨µ¥ PEG š¸É
¤¸
…œµ—äÁ¨„»
¨
1500 ¨³ 6000 Ä®o
¤¸
Áž°¦r
ÁŽÈ
œ˜r
˜´Ê
ŠÂ˜n
5 – 40 % Ĝµ¦„´
—µÁ¦·É
¤˜o
œ 10 ml šÎ
µ„µ¦Á…¥n
µÄ®o
Á…o
µ„´
œ ¨o
ª‡n
°¥ Ç Á˜·
¤
Á„¨º
°
trisodium citrate ¨ŠÄœµ¦¨³¨µ¥š¸É
‡œ˜¨°—Áª¨µš¸
¨³œo
°¥ Ç ‹œµ¦¨³¨µ¥Á¦·É
¤Â¥„´Ê
œ œÎ
µ…o
°¤¼
¨š¸É
ŗo
¤µÁ…¸
¥œ
Á¢Å—°³Â„¦¤¦³®ªn
µŠÁž°¦r
ÁŽÈ
œ˜r
…°Š PEG ¨³Á„¨º
° trisodium citrate
„µ¦«¹
„¬µ„µ¦Â¥„Á°œÅŽ¤r
ŨÁž‹µ„µ¦„´
—®¥µ—o
ª¥Áš‡œ·
‡ ATPS ץčo
Á¢Å—°³Â„¦¤
čo
µ¦„´
—®¥µš¸É
ŗo
®¨´
Š‹µ„„µ¦ÁŽœ˜¦·
¢d
ª‹r
Â¥„‹µ„œÊÎ
µ¤´
œ¤³¡¦o
µª ×¥šÎ
µÄ®o
Á…o
¤…o
œ—o
ª¥„µ¦¦³Á®¥Â
¨—‡ªµ¤—´
œ(rotary evaporation) ‹µ„œ´Ê
œ¨³¨µ¥ PEG 1500 ¨³ PEG 6000 —´
ŠÁž°¦r
ÁŽÈ
œ˜r
š¸É
„Î
µ®œ—¨³ž¦·
¤µ–Á„¨º
°
trisodium citrate ˜µ¤Á¢Å—°³Â„¦¤ ‹œÂœn
ċªn
µ¨³¨µ¥Á…o
µ„´
œ‹œ®¤— œÎ
µÅžÁŽœ˜¦·
¢d
ª‹r
š¸É
3300×g Áª¨µ 15 œµš¸
š¸É
°»
–®£¼
¤·
4
o
C Â¥„´Ê
œœÂ¨³¨n
µŠ°°„‹µ„„´
œÂ¨o
ªœÎ
µÅž«¹
„¬µž¦·
¤µ–Þ¦˜¸
œ ¨³Á°œÅŽ¤r
ŨÁž˜n
°Åž
„µ¦«¹
„¬µ‡n
µÂ°‡˜·
ª·
˜¸Ê
…°ŠÁ°œÅŽ¤r
ŨÁž
‡n
µÂ°‡˜·
ª·
˜¸Ê
…°ŠÁ°œÅŽ¤r
ŨÁž (modified Kilcawley
et al
. 2002) ץčo
p
-nitrophenylplamitate Áž}
œ
´
Á˜¦š n
¤Á°œÅŽ¤r
š¸É
°»
–®£¼
¤·
40
o
C Áž}
œÁª¨µ 30 œµš¸
š¸É
pH 8.5 œÎ
µÅžª´
—‡n
µ„µ¦—¼
—„¨º
œÂŠš¸É
410 nm ¨o
ªÁš¸
¥
„´
„¦µ¢¤µ˜¦“µœ…°Š
p
-nitrophenol n
ªŠ‡ªµ¤Á…o
¤…o
œ 0.0-0.1 ôg ×¥„Î
µ®œ—Ä®o
1 ®œn
ª¥…°ŠÁ°œÅŽ¤r
ŨÁž®¤µ¥™¹
Šž¦·
¤µ–Á°œÅŽ¤r
š¸É
Á¦n
Šž’·
„·
¦·
¥µ„µ¦¨µ¥¡´
œ›³Á°Áš°¦r
…°Š
p
-nitrophenylplamitate ŗo
Áž}
œ
p
-nitrophenol
1 ômol ˜n
°œµš¸
£µ¥Ä˜o
£µª³š¸É
„Î
µ®œ—
„µ¦®µž¦·
¤µ–Þ¦˜¸
œ ¨³«¹
„¬µ¦¼
žÂÃž¦˜¸
œ—o
ª¥Áš‡œ·
‡ÃŽÁ—¸
¥¤Ã—Á—Ž·
¨Ž´
¨Á¢˜ ¡°¨·
°³‡¦·
¨µÅ¤—r
Á‹¨ °·
Á¨‡Ã˜¦-
⨷
Ž·
(SDS-PAGE)
„µ¦®µž¦·
¤µ–Þ¦˜¸
œÄo
ª·
›¸
Bradford(1976) ª´
—‡n
µ„µ¦—¼
—„¨º
œÂŠš¸É
595 nm ¨o
ªÁš¸
¥„´
„¦µ¢ BSA
¤µ˜¦“µœš¸É
‡ªµ¤Á…o
¤…o
œÄœn
ªŠ 0-100 ôg ¨³«¹
„¬µ¦¼
žÂÂ™Ãž¦˜¸
œ—o
ª¥Áš‡œ·
‡ SDS-PAGE čo
3% straking gel
¨³ 12 % separating gel ¥o
°¤—o
ª¥ Coomassie brilliant blue R-250 ˜´
ª°¥n
µŠÃž¦˜¸
œÄœµ¦„´
—®¥µÂ¨³´Ê
œÁ„¨º
°
šÎ
µ„µ¦Ÿ¤„´
 sample buffer °´
˜¦µn
ªœ 1:3 ˜´
ª°¥n
µŠ 5ôl n
ªœÃž¦˜¸
œÄœ´Ê
œ PEG Ÿ¤—o
ª¥ sample buffer Ĝ
°´
˜¦µn
ªœ 2:1˜´
ª°¥n
µŠ 30ôl
„µ¦«¹
„¬µ‡ªµ¤šœ˜n
°°»
–®£¼
¤·
Ĝ„µ¦šÎ
µŠµœ…°ŠÁ°œÅŽ¤r
ŨÁž
«¹
„¬µÄœn
ªŠ°»
–®£¼
¤·
˜´Ê
ŠÂ˜n
50-90
o
C ×¥«¹
„¬µÁ°œÅŽ¤r
Ĝ´Ê
œÁ„¨º
°Â¨³ PEG Áš¸
¥„´
µ¦„´
—®¥µn
¤š¸É
°»
–®£¼
¤·
˜n
µŠ Ç Áž}
œÁª¨µ 1 ¤. š·Ê
ŠÄ®o
Á¥È
œš¸É
°»
–®£¼
¤·
®o
°ŠÂ¨o
ªšÎ
µ„µ¦ª´
—‡n
µÂ°‡˜·
ª·
˜¸Ê
Á°œÅŽ¤r
˜n
°Åž
1...,142,143,144,145,146,147,148,149,150,151 153,154,155,156,157,158,159,160,161,162,...2023
Powered by FlippingBook