เอกสารการประชุมวิชาการและเสนอผลงานวิจัย มหาวิทยาลัยทักษิณ ครั้งที่ 19 2552 - page 895

3
„µ¦ž¦³»
¤ª·
µ„µ¦Â¨³Áœ°Ÿ¨Šµœª·
‹´
¥¤®µª·
š¥µ¨´
¥š´
„¬·
– ‡¦´Ê
Šš¸É
19
ž¦³‹Î
µže
2552
°»
ž„¦–r
¨³ª·
›¸
„µ¦
„µ¦„´
—Á°œÅŽ¤r
ŨÁž‹µ„ÁœºÊ
°¤³¡¦o
µª
šÎ
µ„µ¦„´
—ÁœºÊ
°¤³¡¦o
µª—o
ª¥µ¦¨³¨µ¥´
¢Á¢°¦r
50 mM Sodium acetate ¡¸
Á° 4 -6 50 mM Tris-base
¡¸
Á° 7-9 ×¥„´
—Äœ°´
˜¦µn
ªœ…°ŠÁœºÊ
°¤³¡¦o
µª˜n
°µ¦¨³¨µ¥´
¢Á¢°¦r
Áž}
œ 1:1(w/v) µ¦„´
—š¸É
ŗo
œÎ
µ¤µ„¦°ŠÂ¨³
œÎ
µÅžÁŽœ˜¦·
¢d
ª‹r
š¸É
‡ªµ¤Á¦È
ª 8,000 rpm Áž}
œÁª¨µ 15 œµš¸
Â¥„Á°µÁŒ¡µ³µ¦¨³¨µ¥´Ê
œœÊÎ
µÂ¨o
ªœÎ
µÅžÁŽœ˜¦·
¢d
ª‹r
°¸
„
‡¦´
Ê
Šš¸É
‡ªµ¤Á¦È
ª 10,000 rpm Áž}
œÁª¨µ 15 œµš¸
Â¥„µ¦¨³¨µ¥´Ê
œœÊÎ
µÄš¸É
ŗo
Á„È
š¸É
°»
–®£¼
¤·
4
o
C
„µ¦Â¥„Á°œÅŽ¤r
ŨÁž—o
ª¥¦³µ¦¨³¨µ¥œÊÎ
µ°Šª´
’£µ‡
„µ¦Â¥„Á°œÅŽ¤r
ŨÁž‹µ„¤³¡¦o
µªÃ—¥Äo
¦³µ¦¨³¨µ¥œÊÎ
µ°Šª´
’£µ‡
ץčo
5% 10 % 15% ¨³
20% …°Š Polyethylene glycol 1500
„´
Á„¨º
° Tripotassium citrate œÎ
µµ¦„´
—Á°œÅŽ¤r
¤µŸ¤„´
 Polyethylene
glycol 1500 ˜µ¤Áž°¦r
ÁŽÈ
œš¸É
„Î
µ®œ— ¨³¨µ¥Ä®o
Á…o
µ„´
œš¸É
°»
–®£¼
¤·
4
o
C ‹µ„œ´Ê
œÁ˜·
¤Á„¨º
° Tripotassium citrate š¸É
¨³œo
°¥
Ç ¨ŠÄœ…°ŠŸ¤—´
Š„¨n
µªš¸É
¤¸
„µ¦‡œ˜¨°—Áª¨µ ‹œ…°ŠŸ¤Â¥„ 2 ´Ê
œ ×¥´Ê
œœÁž}
œ´Ê
œ PEG ´Ê
Ϭn
µŠÁž}
œ´Ê
œ…°Š
µ¦¨³¨µ¥Á„¨º
° Ş®µ‡n
µ °‡˜·
ª·
˜¸Ê
…°ŠÁ°œÅŽ¤r
ŨÁžž¦·
¤µ–Þ¦˜¸
œ ¨³«¹
„¬µ‡»
–¤´
˜·
…°ŠÁ°œÅŽ¤r
˜n
°Åž
„µ¦®µ‡n
µÂ°‡˜·
ª·
˜¸Ê
…°ŠÁ°œÅŽ¤r
ŨÁž
‡n
µÂ°‡˜·
ª·
˜¸Ê
…°ŠÁ°œÅŽ¤r
ŨÁž (modified Kilcawley
et al
. 2002) šÎ
µÅ—o
×¥œÎ
µ˜´
ª°¥n
µŠ 200 ôl Á˜·
¤¨ŠÄœ
0.1 mM Tris-HCl buffer (pH 8.0) 2.45 ml š¸É
ž¦³„°—o
ª¥ 0.15 M NaCl ¨³ 0.5% Triton X-100 š¸É
Ÿn
µœ„µ¦°»n
œš¸É
40 ºC Áž}
œÁª¨µ 5 œµš¸
¨o
ª Á˜·
¤ 50 mM
p
-nitrophenylpalmitate(š¸É
¨³¨µ¥Äœ Acetonitrile) 200 ôl ¨o
ªœÎ
µÅžn
¤š¸É
°»
–®£¼
¤·
40 ºC Áž}
œÁª¨µ 30 œµš¸
œÎ
µÅžª´
—‡n
µ„µ¦—¼
—„¨º
œÂŠš¸É
410 nm œÎ
µ‡n
µ„µ¦—¼
—„¨º
œÂŠš¸É
ŗo
Áš¸
¥„´
„¦µ¢
¤µ˜¦“µœ…°Š
p
-nitrophenol š¸É
n
ªŠ‡ªµ¤Á…o
¤…o
œ 0.0 - 0.1 ôg ×¥„Î
µ®œ—Ä®o
1 ®œn
ª¥…°ŠÁ°œÅŽ¤r
ŨÁž®¤µ¥™¹
Š
ž¦·
¤µ–Á°œÅŽ¤r
š¸É
Á¦n
Šž’·
„·
¦·
¥µ„µ¦¥n
°¥
p
-nitrophenylpalmitate Įo
ŗo
p
-nitrophenol 1 ômol ˜n
°œµš¸
£µ¥Ä˜o
£µª³š¸É
„Î
µ®œ—
„µ¦®µž¦·
¤µ–Þ¦˜¸
œÂ¨³„µ¦Â¥„Þ¦˜¸
œ—o
ª¥Áš‡œ·
‡ÃŽÁ—¸
¥¤Ã—Á—Ž·
¨Ž´
¨Á¢˜ ᨷ
°³‡¦·
¨µÅ¤—r
Á‹¨ °·
Á¨‡Ã˜¦Ã¢¦·
Ž·
(SDS-PAGE)
„µ¦®µž¦·
¤µ–Þ¦˜¸
œ—o
ª¥ª·
›¸
Lowry method (1951: 265-275) ¨³œÎ
µ‡n
µ„µ¦—¼
—„¨º
œÂŠš¸É
650 nm ¤µ
Áš¸
¥„´
„¦µ¢ BSA ¤µ˜¦“µœÄ®o
¤¸
‡ªµ¤Á…o
¤…o
œ˜´Ê
ŠÂ˜n
0 – 1.6 mg ¨³—¼
¦¼
žÂ„µ¦Â¥„…°ŠÃž¦˜¸
œ—o
ª¥Áš‡œ·
‡
SDS-PAGE
„µ¦Â¥„Þ¦˜¸
œ—o
ª¥Áš‡œ·
‡Á‹¨¢d
ªÁ˜¦´
œÃ‡¦¤µÃš„¦µ¢¢e
(gel filtration chromatography)
œÎ
µµ¦„´
—´Ê
œ PEG ¨³µ¦„´
—´Ê
œÁ„¨º
°¤µŸn
µœ‡°¨´
¤œr
Sephadex-G 100 š¸É
¡¸
Á° 8 čo
‡°¨´
¤œr
¥µª
60 Ž¤. ץĮo
¤¸
°´
˜¦µÁ¦È
ª…°Šµ¦¨³¨µ¥´
¢Á¢°¦r
20 ml/h œÎ
µÅžª´
—ž¦·
¤µ–Þ¦˜¸
œ ¨³‡n
µÂ°‡˜·
ª·
˜¸Ê
…°ŠÅ¨Áž
„µ¦®µ‡ªµ¤šœ˜n
°°»
–®£¼
¤·
Ĝ„µ¦šÎ
µŠµœ…°ŠÁ°œÅŽ¤r
ŨÁž
šÎ
µ„µ¦«¹
„¬µ‡ªµ¤šœ°»
–®£¼
¤·
Ĝn
ªŠ°»
–®£¼
¤·
˜´Ê
ŠÂ˜n
50 – 80
o
C š¸É
Áª¨µ 60 œµš¸
×¥«¹
„¬µÁ°œÅŽ¤r
ŨÁžš´Ê
ŠÄœµ¦„´
—®¥µ µ¦„´
—´Ê
œ PEG ¨³µ¦„´
—´Ê
œÁ„¨º
°
„µ¦Á¦n
Šž’·
„·
¦·
¥µš¦µœÁ°Áš°¦·
¢d
Á‡´
œ(tranesterification)
„µ¦Á¦n
Šž‘·
„·
¦·
¥µ—o
ª¥ÁÃ—¥ Á˜·
¤µ¦¨³¨µ¥Â°¨„°±°¨r
¨ŠÅž°¥n
µŠo
µÇĜœÊÎ
µ¤´
œ¡º
š¸É
čo
Áž}
œµ¦˜´Ê
Š˜o
œÃ—¥
´
—n
ªœœÊÎ
µ¤´
œ¡º
˜n
° µ¦¨³¨µ¥Á¤š°„ÅŽ—r
×¥œÊÎ
µ®œ´
„Äœ°´
˜¦µn
ªœ 5:1 Á…¥n
µÁ¡ºÉ
°Ä®o
Á„·
—ž’·
„·
¦·
¥µÁž}
œÁª¨µ 15 œµš¸
˜´Ê
Šš·Ê
ŠÄ®o
Á„·
—ž’·
„·
¦·
¥µÁž}
œ Áª¨µ 4 ´É
ªÃ¤Š (š¸É
°»
–®£¼
¤·
60
o
C)
1...,885,886,887,888,889,890,891,892,893,894 896,897,898,899,900,901,902,903,904,905,...1457
Powered by FlippingBook