full2012.pdf - page 110

„µ¦«¹„¬µ„µ¦‡Š°¥¼n °Š¡¨µ¤·— pHentAI Ĝ Bacillus subtilis
Study on Segregrational Stability of pHentAI in Bacillus subtilis
อรอนงค์ สมทรัพย์1 และ มณฑล เลิ ศคณาวนิชกุล2*
On-anong Somsap1 and Monthon Lertcanawanichakul2*
š‡´—¥n°
โคลนยี นแบคเทอริโอซิ น entAI จาก Enterococcus faecium N15 เข้าสู่ Escherichia coli DH5Į และ Bacillus
subtilis ISW1214 ด้วยพลาสมิดพาหะ pHY300PLK ให้ชื่ อว่า pHentAI ซึ่ งแสดงการคงอยู่ของยีนเมื่ อศึกษาด้วยการตัด
ด้วยเอนไซม์ตัดจําเพาะ EcoRI และ XbaI และตรวจสอบด้วยอะกาโรสเจลอิเล็คโตรโฟรี ซี ส พบว่าประกอบด้วยชิ้นยี น
ขนาด 4.87 kb ของ pHY300PLK และ 0.7 kb ของ entAI และยังคงแสดงการคงอยู่ของยีน entAI เมื่อทําการย้าย พลาสมิ ด
ลูกผสม pHentAI เข้าสู่ B. subtilis ISW1214 เมื่ อศึกษาด้วยปฏิกิ ริ ยาลูกโซ่พอลิ เมอเรส แต่พบว่ามีการถ่ายทอด พลาสมิ ด
ลูกผสมไปยังรุ่ นลูกได้เพียงแค่ 6 รุ่ น ภายใต้สภาวะที่ไม่มียาปฏิชีวนะ
‡ÎµÎ µ‡´: เอนเทอโรคอคคัส ฟี เซี ยม เอ็น15 การคงอยู่ของพลาสมิด บาซิลลัส ซับติลิ ส ไอเอสดับเบิ้ลยู1214 เอชเชอริ เชีย
โคไลดีเอ็ช 5 แอลฟ่ า
Abstract
Bacteriocin gene, entAI, from Enterococcus faecium N15 was subcloned into E. coli DH5Į by using
pHY300PLK as shuttle plasmid vector by means of transformation method. The recombinant bacteriocin gene,
pHentAI, was digested with EcoRI and XbaI showed the structural stability, comprised of 4.87 kb fragment of
pHY300PLK and 0.70 kb fragment of entAI gene when analysed by means of agarose gel electrophoresis. Then,
pHentAI was transformed into B. subtilis ISW1214, showed the structural stability when analysed by means of
polymerase chain reaction (PCR). The segregrational stability of pHentAI was approximately 6 passages under non-
selective condition.
Keywords: Enterococcus faecium N15, segregation stability, B. subtilis ISW1214, E. coli DH5Į
1นักศึกษา ปริ ญญาเอก สาขาชีวเวชศาสตร์ สํานักวิชาสหเวชศาสตร์ และสาธารณสุขศาสตร์ มหาวิทยาลัยวลัยลักษณ์ นครศรีธรรมราช 80160
2ผศ. ดร. สํานักวิชาสหเวชศาสตร์และสาธารณสุขศาสตร์ มหาวิ ทยาลัยวลัยลักษณ์ นครศรีธรรมราช 80160
*Corresponding author: e-mail:lmonthon@wu.ac.th
110
การประชุมวิชาการระดับชาติ มหาวิ ทยาลัยทักษิณ ครั้งที่ 22 ประจำปี 2555