การประชุมวิชาการระดับชาติมหาวิทยาลัยทักษิณ 2559 - page 83

82
กรณี A = Ac หมายถึงไม่ สร้างฟิล์ มชีวภาพ(no biofilm) สาหรับกรณีที่ A > Ac = (2×Ac) หมายถึงสร้างฟิล์มชี วภาพเล็กน้อย
(weak) A > (2×Ac) = (4×Ac) หมายถึง สร้ างฟิล์มชีวภาพปานกลาง (moderate) และ A > (4×Ac) หมายถึง สร้ าง
ฟิ ล์มชีวภาพสูง(strong)
2. การใช้ แบคทีเรียเสริมชีวนะ Bacillus A5 เลี้ยงสุ กร
สุ กรที่ใช้ในการทดลองเป็นสายพั นธุ์ผสมระหว่าง Large White-Landrace-Hamshair โดยทดสอบประสิ ทธิภาพการ
เจริญซึ่งใช้สุ กรในช่วง 6 สัปดาห์แรกหลังการหย่ านมทั้งหมด 8 ตั ว ที่มีน้าหนักเฉลี่ยเริ่มต้น 18 กิโลกรั ม นา Bacillus A5 มา
เลี้ ยงในอาหาร NB หลังจากนั้นนาเอาอาหารที่มีความเข้มข้นของหัวเชื้อเริ่ มต้น 2.4 x 108cfu/mL มาผสมกับอาหารให้ลู กหมู
กิ นโดยแบ่ งกลุ่มการทดลองเป็น 2 ชุ ด ชุดแรกเป็นชุดควบคุมใช้อาหารผสมกับ NB และชุดที่สองเป็นอาหารที่ผสมกั บเชื้อ
Bacillus A5 โดยให้อาหาร 2 มื้ อต่อวั นเท่ากัน ชั่งน้ าหนักหมูในช่ วงเช้าของการเริ่มต้นการทดลอง(วันที่ 0) และวันที่ 7
และวันที่ 21 ของการทดลอง จากนั้นทาการ challenge test ด้วย Salmonella Typhimurium ที่มีปริมาณเซลล์เข้มข้น
2.4 x 109cfu/mL ในวันที่ 31 ของการทดลอง และชั่ งน้าหนักอีกครั้งในวั นที่ 41 ของการทดลองและนาค่าที่ได้ ไปคานวณ
อั ตราการแลกเนื้อ (Feed Conversion Ratio : FCR)
3. การคั ดเลือกแบคที่เรี ยในการผลิตเอนไซม์อัลฟาอะไมเลส
นาเชื้ อสายพันธุ์ที่สามารถยั บยั้งการเติบโตของแบคที เรียทดสอบได้จากข้อ 1 มาคัดเลือกสายพั นธุ์ที่ ผลิตเอนไซม์
อั ลฟาอะไมเลสได้สูง โดยเลี้ยงในอาหารเหลวซึ่ งประกอบด้วย ผงมันสาปะหลังเส้นบด(ขนาดไม่ เกิน 0.5 มิ ลลิเมตร) 2.0 กรัม,
Peptone 2.0 กรั ม, KH2 PO4 2.5 กรัม, Na2 HPO4 2.5 กรั ม, NaCl 1.0 กรัม, (NH4 )2SO4 2.0 กรัม, MgSO4 .7H2 O 0.05 กรัม
และ CaCl 2 0.075 กรัม ภายหลั งการเติ มกล้าเขื้อที่เตรียมจากอาหาร NB แล้ว จึงนาไปบ่ มที่เครื่องเขย่ าที่ความเร็ วรอบ 200
รอบต่อนาที ณ อุณหภูมิห้อง เป็นเวลา 32 ชั่วโมง และปั่นเหวี่ยงที่ความเร็วรอบ 10,000 รอบต่ อนาที ที่อุ ณหภูมิ 4 ˚C นาน
10 นาที นาส่วนในที่ได้ไปวั ดกิจกรรมของเอนไซม์อั ลฟาอะไมเลส
4. การคัดเลื อกแหล่งไนโตรเจนที่ เหมาะสมต่ อการผลิตเอนไซม์อัลฟาอะไมเลสและแบคทีเรียสารเสริมชีวนะของเชื้อผสม
Bacillus A5 และ Bacillus S9
ถ่ ายกล้าเชื้อที่เลี้ ยง Bacillus A5 และ S9 ที่ เลี้ยงในอาหาร NB อย่ างละ0.5 มล. ในอาหารเหลวซึ่งประกอบด้วย ผง
มันสาปะหลังเส้นบดที่มีขนาดไม่เกิ น 0.5 มิลลิเมตร ปริมาณ 2.0 g/L, KH2 PO4 2.5 g/L, Na2 HPO4 2.5 g/L, NaCl1.0 g/L,
MgSO4.7H2O 0.05 g/L, CaCl2 0.075 g/L และเติมแหล่งไนโตรเจนชนิดต่างๆได้แก่ peptone, beef extract, malt extract,
soy meal, tryptone, casein, skim milk, yeast extract, (NH4 )2SO4, (NH 4)(NO 3), KNO3, NaNO3และ NH4Cl ที่มีปริมาณ
ไนโตรเจนเท่ากับ 0.32 g/L ทาการบ่มเชื้อบนเครื่องเขย่ า จากนั้นทาการเก็บตัวอย่างที่ 32 ชั่วโมง เพื่อไปนับปริมาณเซลล์และ
วิเคราะห์กิ จกรรมของเอนไซม์อัลฟาอะไมเลส
5. การนับปริมาณเซลล์และวิเคราะห์กิจกรรมของเอนไซม์อัลฟาอะไมเลส
การนับปริมาณเซลล์ใช้เทคนิค spread plate ทา 3 ซ้า แล้วทาการนับจานวนโคโลนี บนอาหารเลี้ยงเชื้อ ส่วนการ
วิเคราะห์กิ จกรรมของเอนไซม์อัลฟาอะไมเลสทาได้โดยปั่นเหวี่ยงที่ ความเร็วรอบ 10,000 รอบต่อนาที ที่ อุณหภูมิ 4˚C นาน 10
นาที แล้วนาส่ วนใสไปวิเคราะห์ หากิจกรรมของเอนไซม์อั ลฟาอะไมเลสตามวิธีของ Fuwa [9] กาหนดให้ 1 หน่ วยของเอนไซม์
อั ลฟาอะไมเลส เท่ากับปริมาณเอนไซม์ ที่ย่อยแป้ง 1 มิลลิกรัม ภายในเวลา 1 นาที ภายใต้สภาวะที่ทดสอบ